五灵脂低温超微粉碎特性考察

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王小平1,3，韩丽1，任桂林1，柯刚2，张定堃1，黄攀1，杨明1,2

（1.成都中医药大学，中药资源系统研究与开发利用重点实验室，成都 611137;

2.江西中医学院，现代中药制剂教育部重点实验，南昌330004；

3.江西中医药高等专科学校，江西抚州 344000）

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[摘要] 目的：研究五灵脂的粉体学性质，探讨其粉体学性质与体外溶出行为的相关性。方法：采用振动式低温超微粉碎机对五灵脂进行粉碎，每3min取样，检测样品粒径、比表面积、孔隙率；以总黄酮含量为指标，考察五灵脂粉体的体外溶出速率，并分析其粉体学性质与体外溶出行为的相关性。结果：随着粉碎时间的增加，粒径逐渐减小，比表面积及体外溶出速率逐渐增加；粉末粒径与体外溶出速率具有良好相关性。五灵脂粉碎时间选择21 min，粒径以d0.9约100 μm为宜。结论：五灵脂低温超微粉碎后粒子形态及结构均匀，溶出速率快，有助于后续制剂工艺及质量控制的评价。

[关键词] 粒径；比表面积；孔隙率；吸附-脱附等温线；溶出速率；五灵脂；粉体学特性

[中图分类号] R283.2；R283.6 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903（2014）08-0001-04

[ doi] 10.13422/j. cnki. Syfix.2014080001

[网络出版地址] http://www.cnki.net/kcms/doi/10.13422/j. cnki.syfjx.000026.html

[网络出版时间] 2014-02-07 15:07

Investigation of Cryogenic Pulverization Properties of Faeces Trogopterori

WANG Xiao-ping’3,HAN Li’’, REN Gui-lin’，KE Gang’,

ZHANG Ding-kun’,HUANG Pan’,YANG Ming’?

(1. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine (TCM), Key Laboratory of System Research and Development of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, China;

2. Jiangxi University of TCM,Key Laboratory of Modern Preparation of TCM, Ministry of Education, Nanchang 330004, China;

3. Jiangxi Traditional Chinese Medical College, Fuzhou 344000, China)

[Abstract] Objective: To study powder properties of Faeces Trogopterori and investigate relativity between powder properties and in vitro dissolution behavior. Method: Faeces Trogopterori was crushed by vibration type low temperature ultrafine pulverizer, sampling every 3 min, particle size, specific surface area and porosity of samples were detected;With the content of total flavonoids as index, in vitro dissolution rate of Faeces Trogopterori powder was investigated, relativity between powder properties and in vitro dissolution behavior was analyzed. Result: With increasing grinding time, particle size decreased, specific surface area and in vitrodissolution rate increased; Powder size and in vitro dissolution rate had a good correlation. Grinding time of Faeces Trogopterori selected 21 min, but particle size of do., should choose was about 100 pm. Conclusion: After low-temperature ultrafine ground of Faeces Trogopterori, particle morphology and structurewas uniform with high dissolution rate, which was helpful forits subsequent evaluation of preparation process and quality control.

[Key words] Particle size; specific surface area; porosity; adsorption-desorption isotherms; dissolutionRate; Faeces Trogopterori; powder properties

五灵脂又名药本、寒号虫粪、灵脂等，具有活血止痛、化瘀止血的功效，常用于治疗胸痛、痛经、产后血瘀疼痛、虫蛇咬伤等症[1-3]，主要成分包括黄酮类、酚酸类、三萜类和核苷类等化合物[4-6]，其中黄酮类成分与该药味主要功效——活血化瘀具有相关性[7]。五灵脂中含有大量纤维，普通粉碎难度大，难以获得粒子形态及结构均匀的粉体，影响制剂后续的混合、成型工序及体外溶出行为，难以保证临床疗效。本实验采用振动式低温超微粉碎方式对五灵脂进行粉碎，研究其粉体学性质，同时以总黄酮含量为指标，考察五灵脂粉体的体外溶出速率，探讨粉体学性质与体外溶出行为的相关性。

1材料

SYFM-8Ⅱ型振动式药物超微粉碎机(济南松岳机器有限责任公司），BD-02A型高速多功能粉碎机（上海冰都电器有限公司），Mastersizer 2000型激光粒度仪（马尔文公司），TriStar3000型全自动比表面积及孔隙率测定仪（美国麦克公司），DZF-6050型真空干燥箱（上海新苗医疗器械制造有限公司），AB265-S型电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司），FST-ⅢI-10型精密型超纯水机（上海富诗特），TU-1901型紫外-可见分光光度计（北京普析），ZRS-8L型智能溶出实验仪（天津市盛鑫通达科技有限公司）。醋五灵脂饮片（四川科伦天然药物有限公司，经成都中医药大学中药炮制教研室许润春副教授鉴定为需鼠科动物复齿需鼠Trogopterus xanthipes Milne-Edwards的干燥粪便），山奈酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号110861-200808，纯度98%），试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1样品的制备将五灵脂饮片置于60℃烘箱中真空干燥3h，利用高速多功能粉碎机粉碎至全部过四号筛，过五号筛≤60%，经60℃真空干燥至含水率<4%，得五灵脂初始粉末。称取该粉末800g，运用振动式药物超微粉碎机于-10℃粉碎，每隔3min取样，直至25 min全部取出，置干燥器中密封保存。

2.2粒径的测定称取样品10份，每份约3g，置于表面皿中，真空干燥4h，利用激光粒度仪测定各样品的粒子体积累积分布图中90%处粒径值（d0.9），以d0.9为纵坐标，粉碎时间为横坐标，得回归方程Y=0.357 7X²-19.966X+364.84(r=0.9978,P<0.001)。结果表明五灵脂在粉碎过程中存在快速变化区-缓慢变化区-粉碎平衡区-逆粉碎区，在0~21 min内d0.9由360 μm迅速减小至100μm，为粉碎的快速变化区，表明大块物料被快速粉碎成碎物料并伴有细胞壁破碎过程；21~24 min内d0.9仅由100 μm减小至92 μm，为缓慢变化区，药物呈研细状态；由方程推算在27.91 min时粒径达最小值86.23μm，而后粒子聚集，粒径增加，进入逆粉碎区。

2.3比表面积及孔隙率的测定称取五灵脂初始粉末和粉碎9，15，21，25 min粉末，分别置于称量瓶中，减压干燥除去大部分水分，将待测粉体样品装在一段封闭的试管状样品管内，用普通氮气吹至样品恒重，测定各样品的比表面积与孔隙率，结果见表1,2和图1。

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由表1,2可知，随着粉碎时间的增加，粒径变小，比表面积及孔隙率增加。相对于原粉，粉碎25 min五灵脂粉末比表面积约为原粉的6倍，孔隙率为原粉的7倍多。粉碎时间由15 min增至21 min时，比表面积迅速增加，当继续增加粉碎时间至25 min时，比表面积增加缓慢，与五灵脂粉碎后粒径变化规律相一致。

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由图1可知，5种样品的吸附-脱附等温线均属于IV型[8]，高压部分曲线陡然增加，表明样品中均存在大孔。A，B，D，E图中吸附-脱附曲线形状相似且基本闭合，说明样品孔形状和尺寸比较均匀，4个样品的孔结构具有相似性[9]。中压部分吸附脱附等温线重合，根据Kelvin方程可知孔半径很小，不会出现毛细管凝聚现象。C图存在明显的滞后曲线，表明此时孔结构存在明显的狭窄裂隙孔，可能是粉碎15min时五灵脂正处于细胞壁破裂阶段。A~D图中粉体对N2吸附量依次增加，而N2吸附量又与粉体比表面积相关，与上述比表面积依次增大相吻合。E图中N吸附量略低于D图，可能是随着粉碎时间延长，粉体粒径不断减小，在比表面积增加的同时，由于粗细粉体的相互吸附而致孔隙率略有下降。

2.4总黄酮的含量测定

2.4.1对照品溶液的配制精密称取于105℃干燥1h的山奈酚对照品15.04 mg，置100mL量瓶中，加无水乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4.2供试品溶液的配制称取五灵脂适量，粉碎过四号筛，精确称取粉末0.2g，置烧瓶中，加入无水乙醇100mL，称定质量，回流提取2h，称定质量，加无水乙醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液0.5mL，加无水乙醇定容至5mL量瓶中，即得。

2.4.3检测波长选择分别量取对照品溶液、供试品溶液适量，加适量无水乙醇稀释，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，于200~400 nm进行全波长扫描，结果二者均在268 nm处有最大吸收。

2.4.4线性关系考察精密量取对照品溶液1mL，置100mL量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液备用。分别精密吸取上述续滤液适量，加无水乙醇稀释成0.150，0.301，0.451，0.602，0.902，1.203，1.504 mg·L-1的系列溶液，以无水乙醇作参比溶剂，于268 nm处测定吸光度（A），以样品质量浓度（C）对A进行回归，得回归方程A=0.590 7C+0.0043（r=0.9994)，线性范围0.150~1.504 mg·L-1。

2.4.5精密度试验量取供试品溶液适量，加无水乙醇适量，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液按2.4.4项下方法连续测定6次，结果A的RSD 0.32%。

2.4.6稳定性试验取2.4.5项下续滤液，分别于0,1,2,4,8，10h按2.4.4项下方法测定，计算A的RSD1.48%，表明供试品溶液在10h内基本稳定。

2.4.7重复性试验精密称取五灵脂粉末6份，按2.4.2项下方法制备供试品溶液，按2.4.4项下方法测定，结果样品中总黄酮平均提取量以山奈酚计0.724 mg-g-1，RSD2.18%。

2.4.8加样回收率试验分别精密称取已知总黄酮含量的五灵脂粉末6份，每份0.1g，各加入山奈酚对照品溶液500pL，按2.4.2项下方法制备供试品溶液，按2.4.4项下方法测定，计算平均回收率，结果见表3。

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2.5溶出度试验选取五灵脂药材初始粉末及粉碎3,6,9，12，15，21,25 min 粉末进行溶出试验。按2010年版《中国药典》二部附录中溶出度测定法第三法测定，转速（50±1）r·min-1，水浴温度（37±0.5）℃，溶出介质为蒸馏水100mL。精密称取各样品0.4g，分别置于溶出仪中进行溶出，于5,10,20,40，60，120，240 min时各取样1mL，同时补充等体积同温度的溶出介质。样品溶液经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液0.5mL，加无水乙醇4.5mL稀释，摇匀，按2.4.4项下方法测定，计算药物浓度，以五灵脂中总黄酮提取量0.724 mg·g-1为100%，计算累积溶出率，结果见图2。

将图2中累积溶出率按威布尔分布模型进行数据处理，以Inln[1-F(t)]-1为纵坐标，Int为横坐标进行直线回归，计算各样品溶出参数t50（溶出50%的时间）和td（溶出63.2%的时间），结果见表4。

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