传统中成药超微粉碎前后粉末质量比较研究

黄一平1，鞠建明1，高美华2，王勇¹

（1.       江苏省中医药研究院，江苏省现代中药制剂工程技术研究中心，江苏 南京210028；

2.雷允上药业有限公司，江苏苏州215003）

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[关键词]：中成药；六神丸；超微粉碎；质量比较

[中图分类号]：R284.1  [文献标识码]：B  [文章编号]:1001-1528(2007)01-0135-02

近年来，超微粉体技术在中药领域中的应用受到了越来越多学者的关注，有关中药超微粉体制备方法、粉体溶出度、药效学方面的应用研究日益增多[1-3]，本文通过对六神丸超微粉碎前后粉末的质量进行比较研究，旨在为传统中成药超微粉的合理使用和为提高疗效、减少服用量、提高传统中药制剂水平等方面提供佐证和实验依据。

1仪器与材料

1.1仪器 GQF-1圆盘式气流粉碎机(南京理工大学兵器工业化超细粉体技术开发中心)；KQ-10013型超声波清洗器(功率100 W,频率40 KHz,昆山市超声仪器有限公司);日本岛津HP5890气相色谱仪；Waters高效液相色谱仪(Alli-ance 2695 四元泵及自动进样系统、Alltech

ELSD2000检测器、Empower色谱工作站；Millipore Milli-Q纯水器;Mastersi-zer Microplus Vet.2.18粒径测定仪（Malnem Instruments Ltd，UK）：METTLER万分之一及十万分之一电子天平：离心机TDL-5-A(上海安亭科学仪器厂)。

1.2材料 六神丸原粉（批号：030818），由雷允上药业有限公司苏州雷允上制药厂按六神丸传统粉碎工艺制备；六神丸超微粉(批号:031201、031203、031205),由南京理工大学兵器工业化超细粉体技术开发中心制备。以上两种粉碎所用药材均由苏州雷允上制药厂提供并鉴定，各药材批号一致。麝香酮和胆酸对照品（均为含量测定用，购自中国药品生物制品检定所，批号分别为：0719-9905和0078-9312）；乙腈为色谱纯，水为超纯水。其它试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1粉末粒径比较见表1。由表1结果可知，药材经超微粉碎后，中位粒径（d50）小于5 μm(比原粉降低了18倍),粒径（d90）小于15 μm(比原粉降低了8倍)。

2.2麝香酮的气相色谱鉴别

2.2.1气相色谱条件[4]

色谱柱2mm×300mm铜管；载体：硅烷化101(40~60目);固定液:5%SE-30;检测器:FID;柱温:180C.进样口210°℃,检测器230°℃;气体流量(mL/min),氮气37,氢气88,空气250。

2.2.2供试品和对照品溶液的制备

供试品溶液：精密称定供试品粉末0.3g，置具塞三角烧瓶中，精密加苯2mL，精密称定，超声提取5m in置30min，称定重量，加苯补足减失重量，摇匀，滤滤液作为供试品溶液对照品溶液，精取麝香酮对照品5mg，加苯溶解并定容至5mL，作为对照品溶液。

2.2.3气相色谱鉴别 分别取对照品溶液和样品溶液各1μL，注入气相色谱仪，记录出峰时间。结果见表1。

结果，麝香酮对照品峰保留时间为10.68 min，原粉和超微粉中保留时间分别为10.67和10.69 min。原粉和超微粉CC色谱与麝香酮对照品色谱峰的保留时间相同，说明原粉和超微粉均检出麝香酮。

2.3 胆酸的ELSD-HPLC测定[5-6]

2.3.1色谱条件 色谱柱，AltimaC1815μ(4.6mmx250mm);流动相:乙腈-0.3%乙酸溶液(45：55);流速:1.0 ml/min;柱温;35°C;ELSD漂移管温度110℃；载气流量1.5L/min；以外标两点对数方程计算样品的含量。在此色谱条件下，胆酸与相邻峰达到基线分离，分离度大于1.5，理论板数按胆酸峰计算可达10000。同时取阴性供试品溶液进样，结果，阴性供试品在胆酸色谱峰位置处无相应峰出现。对照品、样品及阴性供试品的高效液相色谱图，见图1、2、3。

2.3.2 标准曲线制备 精密称取胆酸对照品适量，加甲醇溶解制成每1 mL含2.044mg的溶液，精密吸取胆酸对照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0 μL.注入液相色谱仪,测定其峰面积,结果表明,在1.022-40.880 μg 范围内，胆酸峰面积积分值自然对数与进样量自然对数有良好的线性关系,求得其回归方程为:Y=4.97+1.51X,r=0.999 4。

2.3.3 精密度试验 精密吸取对照品溶液(0.499 mg/mL)，连续进样6次，每次10μL,峰面积的 RSD=1.3%,结果表明，精密度良好。

2.3.4样品提取溶媒的选择 精密称取本品0.5g（批号：031205），置锥形瓶中，分别用甲醇、10%冰醋酸甲醇液和10%冰醋酸乙醇液为提取溶媒，分次转移至50 mL的量瓶中，溶剂加至近刻度时超声处理40min，定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm）滤过，在选定的分析条件下，注入高效液相色谱仪，根据测定液的浓度，计算样品的含量。结果表2。

结果表明，3种溶媒对胆酸的提取，以甲醇和10%冰醋酸甲醇效率相对较高，因甲醇无须配制，可直接使用故选用甲醇为提取溶媒。

2.3.5样品超声时间考察 精密称取本品0.5g（批号031205），置锥形瓶中，用甲醇为提取溶媒，分次转移至50mL的量瓶中，溶剂加至近刻度，分别超声20、30、10、50 min，定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，在选定的分析条件下，注入高效液相色谱仪，根据测定液的浓度，计算样品的含量。见表3.

以上结果表明，超声20min以后，含量没有多大变化，为了保证提取完全，故确定超声时间为30 min。

2.3.6稳定性试验 按拟定含量测定方法，制备供试液（样品批号：031205)，每隔3h测定一次，RSD=2.5结果，供试液在12h内稳定。

2.3.7 重复性试验 按拟定的含量测定方法，取（批号：031205)样品分别制备供试液，测得峰面积并计算含胆酸含量RSD=2.0

2.3.8加样回收试验 取本品（批号为：031205，胆酸平均含量为23.1mg/g)约30mg，精密称定，加入一定量胆酸对照品，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声30 min再称定重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按选定的分析条件，注入高效液相色谱仪，计算回收率，结果见表4

2.3.9样品制备与测定 取3批超微粉样品各0.5g（六神丸原粉批号：030818,平均胆酸含量19.0 mg/g),精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声30 min(功率100 W,频率40KHz),再称定重量,摇匀，滤过,取续滤液,即得分别精密吸取对照品溶液（0.499 mg/mL)5μL和20μL、供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定，以外标两点对数方程计算供试品的含量，结果见表5。

3讨论

研究结果表明，与原粉相比，药材经超微粉碎后，中位粒径（d50)小于 5 μm(比原粉降低了18倍），粒径（d90)小于15 μm(比原粉降低了8倍）；GC鉴别原粉与超微粉均检出有麝香酮，在相同提取条件下，超微粉胆酸平均含量为22.8mg/g，原粉胆酸平均含量为19.0mg/g，说明超微粉中胆酸的溶出度较原粉中胆酸的溶出度要高。结果提示：超微粉碎使微粉颗粒粒径更小，大小分布更为均匀，比表面积显著提高，从而使药物与机体亲和力变大，有利于药物的释放和溶解。有利于机体对有效成分的吸收利用，增强疗效，大大提高原生药材的生物利用度和治疗效果。

从六神丸所用药味的特性及传统应用来看，均不适于提取。因此，超微粉碎为提高六神丸的疗效、减少服用量等方面提供了途径，为传统中药制剂水平的提高提供了佐证和实验依据，也为传统复方的剂型现代化改革提供了技术平台。

部颁标准中收载的六神丸质量标准系采用薄层扫描法测定胆酸的含量，但由于薄层扫描法重现性差，操作繁琐，本品采用ELSD-HPLC法测定胆酸的含量，方法学研究结果表明，本法具有分离效果好、快速、灵敏、准确等优点。

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